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NGS測序之文庫構(gòu)建

由于二代測序讀長的限制，不可能一下將一個很長的基因序列測通，因此需要先將長基因序列隨機片段化成小片段，這樣的話，這些片段就可以覆蓋整個基因組。所以需要構(gòu)建文庫。一、文庫構(gòu)建的步驟文庫構(gòu)建大致步驟類似，但是各有各自du特的點，例如，RNAseq里miRNA，lncRNA，mRNA方法各有差異，具體方法以后有機會再補充。這里以Illumina的PE文庫為例，其流程圖如下圖。二、文庫構(gòu)建詳細步驟（1）DNA片段化（FragmentDNA）使用超聲、酶或者加熱的方式將DNA樣品打碎成...

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NGS測序為什么需要文庫構(gòu)建?

NGS即Next-generationsequencing，又叫第二代測序技術(shù)或者高通量測序技術(shù)或者下一代測序技術(shù)。文庫是DNA/RNA樣本在測序前做的一系列準備，因為原始的核酸樣本無法直接用于測序，只有經(jīng)過處理的樣本才能滿足測序平臺的要求，比如在DNA樣本兩端添加測序bi備的接頭；樣本量不足時，可以通過PCR擴增達到上機的要求等。NGS測序為什么需要文庫構(gòu)建?讓我們一起來看看吧！一、DNA文庫構(gòu)建的內(nèi)容（1）片段化及末端修復(fù)（2）加接頭（3）PCR注意：此處忽略磁珠純化的步...

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凍存細胞后續(xù)如何處理？

凍存細胞在收到貨后，后續(xù)如何進行處理呢？如何復(fù)蘇呢？一文讓你了解清楚！一、收到凍存細胞如何處理收到凍存細胞后，請打開包裝箱，檢查箱內(nèi)干冰是否充足，凍存管是否融化，若已經(jīng)融化，請拍照留存，并聯(lián)系客服，若無異常，請及時將凍存管置于超低溫冰箱內(nèi)保存，若長時間不使用，必須在超低溫冰箱內(nèi)過夜后轉(zhuǎn)移至液氮中保存。二、凍存細胞如何復(fù)蘇取100mm培養(yǎng)皿并做好標(biāo)記，加入預(yù)熱好的12ml完quan培養(yǎng)基，將凍存管放入37℃水浴鍋中，輕輕搖晃凍存管，待細胞懸液完quan溶解后，轉(zhuǎn)移至安全柜中操作...

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細胞穩(wěn)定轉(zhuǎn)染和瞬時轉(zhuǎn)染有哪些區(qū)別？

在細胞實驗中，細胞轉(zhuǎn)染是一項常用的技術(shù)，用于引入外源基因、表達蛋白或沉默目標(biāo)基因等。其中，細胞的穩(wěn)定轉(zhuǎn)染和瞬時轉(zhuǎn)染是兩種常見的轉(zhuǎn)染方式。細胞穩(wěn)定轉(zhuǎn)染和瞬時轉(zhuǎn)染有哪些區(qū)別？讓我們一起來看看吧！類別特點適用范圍穩(wěn)定轉(zhuǎn)染長期穩(wěn)定表達目標(biāo)基因長期功能研究和穩(wěn)定表達需求的實驗可通過篩選和擴增獲得穩(wěn)定表達的細胞系長期細胞培養(yǎng)和細胞系建立使用脂質(zhì)體、病毒載體或DNA轉(zhuǎn)染等方法大規(guī)模蛋白表達和基因敲入研究瞬時轉(zhuǎn)染快速實現(xiàn)臨時的基因表達短期功能研究和臨時表達需求的實驗無需篩選和擴增細胞系短期細...

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封閉液有哪幾種？怎么選？

完整的Western實驗過程比較長，經(jīng)常會出現(xiàn)沒有結(jié)果，或者是顯色后背景高了，背景高，目的蛋白顏色對比不明顯，要么看不清，圖片展示不理想，更別說進行數(shù)據(jù)分析了。顯色背景高的原因有很多:封閉問題，洗脫問題，一抗二抗問題等。其中最xian著的就是封閉問題。最常見的封閉就是脫脂奶粉和牛血清白蛋白（BSA），當(dāng)然還有血清，魚皮明膠，聚乙烯吡咯烷酮，封閉液。我們到底應(yīng)該選擇哪種封閉液？怎么選擇呢？讓我們一起來看看不同的封閉液的優(yōu)缺點吧！一、脫脂奶粉最pian宜而且最好買的封閉劑就屬脫脂...

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